? ? ? ? 任何HPLC或UHPLC柱都是有試用壽命的。正確使用和維護(hù)色譜柱可以延長(zhǎng)其使用壽命，有利于該方法的經(jīng)濟(jì)性。重要的是遵循公認(rèn)的色譜慣例，如適當(dāng)?shù)臉悠分苽洌悠窇?yīng)通過(guò)0.45μm的膜過(guò)濾器進(jìn)行高效液相色譜過(guò)濾，通過(guò)0.22μm的過(guò)濾器進(jìn)行超高效液相色譜過(guò)濾）；流動(dòng)相的適當(dāng)質(zhì)量/純度（例如，用于等度模式的等度級(jí)溶劑，用于梯度洗脫的梯度級(jí)溶劑）；過(guò)濾流動(dòng)相，發(fā)展良好的方法，具有足夠強(qiáng)的洗脫能力，以盡量減少非特定的吸附；與所選色譜柱兼容的溫度、pH值和最大背壓范圍。另外值得一提的是，總進(jìn)樣次數(shù)與進(jìn)樣體積成反比，例如，如果每次進(jìn)樣10μL樣品，這導(dǎo)致柱壽命為5000次進(jìn)樣，則每次進(jìn)樣100μL的樣品負(fù)載增加通常會(huì)將柱壽命縮短至約500次進(jìn)樣。
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? ? ? ? 即使仔細(xì)遵循了上面列出的所有要點(diǎn)，用戶有時(shí)也會(huì)覺(jué)得色譜柱的使用壽命應(yīng)該更長(zhǎng)。為了找出如何延長(zhǎng)色譜柱的壽命，首先需要了解是什么導(dǎo)致色譜柱老化。
? ? ? ? 一、顆粒污染/堵塞色譜柱：
? ? ? ? 來(lái)自流動(dòng)相或樣品的任何顆粒材料都會(huì)污染色譜柱，一些顆粒也可能會(huì)遷移到柱填料中。這將導(dǎo)致柱背壓增加。這會(huì)給泵產(chǎn)生更多的應(yīng)力，并可能導(dǎo)致柱沉降，形成空洞，從而導(dǎo)致峰值分裂。
? ? ? ? 二、非特定吸附：
? ? ? ? 高效液相色譜柱在使用過(guò)程中可能會(huì)遇到許多不同的物質(zhì)，例如緩沖液中的鹽或流動(dòng)相和樣品中的雜質(zhì)。這些材料的保留率可能低于或高于分離的分析物。如果探測(cè)器觀察到這些不希望的干擾，則會(huì)出現(xiàn)鬼峰、斑點(diǎn)、基線干擾甚至負(fù)峰。吸收的雜質(zhì)可能會(huì)對(duì)保留機(jī)制產(chǎn)生負(fù)面影響（縮短保留時(shí)間）或開始作為新的固定相（增加保留時(shí)間）。為這個(gè)主題提供的最可靠、最確定的解決方案是什么？使用液相保護(hù)柱！保護(hù)柱將過(guò)濾所有顆粒，積累非特定吸附材料，還將延長(zhǎng)在微堿性pH下使用的分析主柱的壽命。
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? ? ? ? 三、壓力增大
? ? ? ? 每個(gè)顆粒填充柱包含一系列粒徑。粒度分布可能更寬或更窄。在色譜分析過(guò)程中，當(dāng)非加壓注射回路連接到加壓柱時(shí)，柱將承受壓力應(yīng)力。在這些壓力應(yīng)力期間，塔填料受到?jīng)_擊，然后顆?？赡芑Q位置，導(dǎo)致通常較大的顆粒上升（朝向塔入口），較小的顆粒下降（朝向塔出口）。在多次注射后，較小的顆粒將積聚在底部，而較大的顆粒將積聚在頂部。較小的顆粒區(qū)具有較高的堆積密度背壓，用戶將觀察到背壓穩(wěn)步增加。這再次為儀器產(chǎn)生了更大的壓力，并可能導(dǎo)致色譜柱沉降，形成空隙，從而導(dǎo)致峰分裂。
? ? ? ? 許多客戶要求執(zhí)行一些程序，將色譜柱重新生成到初始性能。因此，非常仔細(xì)地閱讀每一列隨附的說(shuō)明書的重要性怎么強(qiáng)調(diào)都不為過(guò)。該表還包含有關(guān)建議的色譜柱保養(yǎng)和再生程序的信息。
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? ? ? ? 然而，我們可以從理論上分析色譜柱再生的效率。通常，只有在色譜柱制造商允許的情況下，才可以通過(guò)反沖模式清洗色譜柱約5到20個(gè)色譜柱體積，輕松去除入口顆粒對(duì)液相色譜柱的污染。重要的是確保兩個(gè)柱狀熔塊（入口和出口）具有相同的孔隙率。請(qǐng)記住，被困在色譜柱填料深處的小雜質(zhì)顆粒不太可能被清除。由于這種清洗，柱背壓應(yīng)該有所降低。從色譜柱中去除非特定結(jié)合物質(zhì)通常更為困難，結(jié)果通常不可預(yù)測(cè)，因?yàn)橥ǔＮ覀儾恢肋@些污染物包含什么化合物。成功率可能在0％到100％之間。對(duì)于填充小于5μm顆粒的色譜柱，完全恢復(fù)色譜柱填充均勻性的可能性很小。通常，柱反沖只在短時(shí)間內(nèi)有效。
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發(fā)布于: 2022-07-15