C18 色譜柱選型指南：如何為您的應(yīng)用選擇最佳色譜柱？
面對(duì)市場(chǎng)上琳瑯滿目的 C18 色譜柱，如何選擇一款最適合您實(shí)驗(yàn)需求的產(chǎn)品，是提升分離效率和數(shù)據(jù)質(zhì)量的關(guān)鍵。下面恒譜生將從分析物特性、實(shí)驗(yàn)條件和特殊應(yīng)用三個(gè)維度，為您提供一套清晰、實(shí)用的 C18 色譜柱選型指南。
1. 按分析物的極性和疏水性選型
C18 色譜柱的核心是疏水作用，因此分析物的疏水性是選型的首要依據(jù)。
非極性或弱極性化合物：
選擇：常規(guī) C18 色譜柱。
理由：這類化合物與 C18 填料的疏水作用強(qiáng)，能獲得足夠的保留時(shí)間和良好的分離度。
強(qiáng)極性或水溶性化合物：
選擇：耐 100% 水相 C18 柱（AQ 柱）。
理由：常規(guī) C18 柱在高水相條件下容易發(fā)生疏水塌陷，導(dǎo)致對(duì)強(qiáng)極性化合物幾乎無(wú)保留。AQ 柱通過(guò)特殊的鍵合技術(shù)解決了此問(wèn)題，能提供有效的保留和分離。
2. 按分析物的酸堿性質(zhì)選型
分析物的 pKa 值決定了其在不同 pH 環(huán)境下的存在狀態(tài)(分子型或離子型)，這直接影響分離效果。
酸性化合物（如苯甲酸）：
選擇：常規(guī) C18 柱或?qū)?pH 耐受 C18 柱。
流動(dòng)相：通常在酸性條件下(如 pH 2-3)進(jìn)行分析，使化合物保持分子型，增強(qiáng)其與固定相的疏水作用。
堿性化合物（如生物堿）：
選擇：寬 pH 耐受 C18 柱(推薦)或經(jīng)過(guò)特殊封端處理的常規(guī) C18 柱。
流動(dòng)相：
高 pH 方案：在堿性條件下(如 pH 8-10)分析，使堿性化合物保持分子型，可獲得對(duì)稱峰形。這需要使用耐高 pH 的色譜柱。
低 pH 方案：在酸性條件下分析，此時(shí)堿性化合物呈離子態(tài)，保留較弱。可通過(guò)在流動(dòng)相中添加離子對(duì)試劑(如庚烷磺酸鈉)來(lái)增強(qiáng)保留，但這會(huì)增加色譜柱維護(hù)的復(fù)雜性。
3. 按分子大小選型
小分子化合物（<1000 Da）：
選擇：常規(guī)孔徑(如 100?-120?)的 C18 柱。
理由：常規(guī)孔徑足以讓小分子自由進(jìn)出，實(shí)現(xiàn)高效分離。
大分子化合物（如多肽、蛋白質(zhì)）：
選擇：大孔徑 C18 柱(如 300?)。
理由：大分子需要更大的孔徑才能進(jìn)入填料內(nèi)部，與 C18 基團(tuán)充分作用。使用小孔徑柱會(huì)導(dǎo)致峰拖尾嚴(yán)重、分離效率低下，甚至無(wú)法保留。
4. 綜合選型決策樹(shù)
您可以遵循以下步驟進(jìn)行選擇：
看分子大?。捍_定是小分子還是大分子? → 選擇常規(guī)孔徑或大孔徑柱。
看水溶性：是否為強(qiáng)極性、水溶性強(qiáng)的化合物? → 是，則優(yōu)先考慮 AQ 柱。
看酸堿性質(zhì)：是酸性、堿性還是中性? → 堿性化合物優(yōu)先考慮寬 pH 柱，以獲得最佳峰形。
看實(shí)驗(yàn)條件：您計(jì)劃使用的流動(dòng)相 pH 范圍是什么? → 如果需要 pH>8 或 pH<2.必須選擇寬 pH 耐受柱。
發(fā)布于: 2025-09-22